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PEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題

更新時間:2018-07-26      點擊次數(shù):5702

QC4058L1080C4058L1090有什么區(qū)別?

A我們有兩種,80是針對線性的,90是支鏈轉(zhuǎn)染,比如慢性病包試劑用90比較好  

Q李記細胞轉(zhuǎn)染液PEI固體自行配制溶液相比的優(yōu)勢在哪里?

A很多客戶買固體很難把握的,固體非常不容易溶解,包裝比較大,用的不多建議您選液體的,已做無菌處理,可以直接使用。

Q接種細胞,必須用膠原酶消化?胰酶不能用么?

A膠原酶從細菌中提取出來的酶,對膠原有很強的消化作用,適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對細胞間質(zhì)有較好的消化作用,對細胞本身影響不大,可使細胞與膠原成分脫離但不受傷害。膠原酶消化的不是細胞表面,而是細胞間質(zhì)。

         胰酶消化作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽腱,除去細胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細胞骨架,從而使細胞分離。對細胞有輕微影響,進而影響后續(xù)轉(zhuǎn)染效率及細胞活性,在一定程度上體現(xiàn)為轉(zhuǎn)染試劑的毒性。

Q使用方法提到,轉(zhuǎn)染細胞時將復(fù)合物(40ul質(zhì)粒稀釋液+40ul 轉(zhuǎn)染試劑稀釋液)滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。此時含細胞的培養(yǎng)皿里面有含血清的培養(yǎng)基么?如果有,體積是多少?以24孔板為例,是0.5ml么?

A培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基成分為正常培養(yǎng)細胞的成分,原來培養(yǎng)時有血清,那就有。培養(yǎng)孔中培養(yǎng)液的體積也是正常情況,你說的對,如果是24孔板,那么體積應(yīng)該是0.5ml

Q:轉(zhuǎn)染細胞步驟中提到,去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液之后呢?要加含血清的培養(yǎng)基么?加多少,以24孔板為例?加完培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)?培養(yǎng)多久?

A:去除含復(fù)合物的培養(yǎng)基,過程是逐步的,有兩個目的,一是盡可能提高轉(zhuǎn)染效率,二是盡可能降低細胞毒性。減少EZ Trans-DNA復(fù)合物的過程,也是恢復(fù)到細胞正常培養(yǎng)基成分的過程。后續(xù)培養(yǎng)多久,說明書為建議時間,你可以通過實驗摸索,要根據(jù)你的轉(zhuǎn)染效率,基因表達情況確定。

Q:轉(zhuǎn)染細胞步驟中提到,這里的7h,指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的7h,還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染7h?- 同樣的,“24-48小時內(nèi)檢測轉(zhuǎn)染效率”指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的24-48h,還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染24-48h

A:所有時間都是從EZ Trans-DNA復(fù)合物與細胞接觸開始.

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